Osteoartritisa (OA) hezur eta artikulazioetako gaixotasun kroniko endekapenezkoetako bat da, 65 urtetik gorako biztanleriari eragiten diona.
1]. Oro har, OA duten pazienteei kartilago kaltetua, sinovia hanturatua eta kondrozito higatuak diagnostikatzen zaizkie, eta horrek mina eta ondoeza fisikoa eragiten ditu [
2]. Artritisaren mina batez ere artikulazioetako kartilagoaren hanturaren ondorioz endekatzeak eragiten du, eta kartilagoa larriki kaltetuta dagoenean, hezurrak elkarren artean talka egin dezakete, mina jasanezina eta zailtasun fisikoak eraginez [
3]. Hanturazko bitartekarien parte-hartzea ondo dokumentatuta dago artikulazioaren mina, hantura eta zurruntasuna bezalako sintomekin. OA duten pazienteetan, kartilagoaren eta hezur subkondralaren higadura eragiten duten zitokina inflamatorioak aurkitzen dira likido sinovialean [
4]. OA duten pazienteek normalean izaten dituzten bi kexa nagusi mina eta sinovialeko hantura dira. Beraz, egungo OA terapien helburu nagusiak mina eta hantura murriztea dira [.
5]. Eskuragarri dauden OA tratamenduek, esteroideak ez diren eta esteroideak barne, mina eta hantura arintzeko eraginkortasuna frogatu duten arren, sendagai horien epe luzeko erabilerak ondorio larriak ditu osasunean, hala nola disfuntzio kardiobaskularrak, gastrointestinalak eta giltzurrunak [
6]. Beraz, albo-ondorio gutxiagoko sendagai eraginkorragoa garatu behar da artrosia tratatzeko.
Osasun-produktu naturalak gero eta ezagunagoak dira seguruak eta erraz eskuragarriak direlako [
7]. Koreako medikuntza tradizionalek eraginkortasuna frogatu dute hainbat hanturazko gaixotasunen aurka, artritisa barne [
8]. Aucklandia lappa DC. bere propietate sendagarriengatik da ezaguna, hala nola qi-aren zirkulazioa hobetzeagatik mina arintzeko eta urdaila lasaitzeko, eta tradizionalki analgesiko natural gisa erabili izan da [
9]. Aurreko txostenek iradokitzen dute A. lappak hanturaren aurkako propietateak dituela [
10,
11], analgesikoa [
12], minbiziaren aurkakoa [
13], eta gastrobabeslea [
14] efektuak. A. lapparen jarduera biologiko desberdinak bere konposatu aktibo nagusiek eragiten dituzte: kostunolida, deshidrokostus laktona, dihidrokostunolida, kostulaktona, α-kostola, saussurea laktona eta kostulaktona [
15]. Aurreko ikerketek diote kostunolidak hanturaren aurkako propietateak zituela lipopolisakaridoan (LPS), eta horrek makrofagoak eragin zituela NF-kB eta bero-talka proteinen bidearen erregulazioaren bidez [
16,
17]. Hala ere, ez dago A. lapparen jarduera potentziala aztertu duen ikerketarik OA tratamenduan. Oraingo ikerketak A. lapparen efektu terapeutikoak ikertu ditu OAren aurka, (monosodio-iodoazetato) MIA eta azido azetikoak eragindako karraskari ereduak erabiliz.
Monosodio iodoazetatoa (MIA) animalien OAren min-jokabide asko eta ezaugarri patofisiologikoak sortzeko erabiltzen da.
18,
19,
20]. Belauneko artikulazioetan injektatzen denean, MIAk kondrozitoen metabolismoa nahasten du eta hantura eta hanturazko sintomak eragiten ditu, hala nola kartilagoaren eta hezur subkondralaren higadura, OAren sintoma nagusiak [
18]. Azido azetikoarekin eragindako bihurritze-erantzuna animaliengan periferiako minaren simulazio gisa hartzen da, non hanturazko mina kuantitatiboki neur daitekeen [
19]. RAW264.7 sagu makrofagoen zelula-lerroa oso erabilia da hanturarekiko zelulen erantzunak aztertzeko. LPSarekin aktibatzean, RAW264 makrofagoek hanturazko bideak aktibatzen dituzte eta hanturazko hainbat bitartekari jariatzen dituzte, hala nola TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS eta IL-6 [
20]. Ikerketa honek A. lapparen efektu antinozizeptiboak eta antiinflamatorioak ebaluatu ditu OAren aurka MIA animalia-ereduan, azido azetikoak eragindako animalia-ereduan eta LPSak aktibatutako RAW264.7 zeluletan.
2. Materialak eta metodoak
2.1. Landare-materiala
Esperimentuan erabilitako A. lappa DC.-ren sustrai lehorra Epulip Pharmaceutical Co., Ltd.-tik (Seul, Korea) lortu zen. Donghun Lee irakasleak identifikatu zuen, Gachon Unibertsitateko Korear Medikuntzako Elkarteko Belar Farmakologia Sailekoa, eta 18060301 zenbakiko ale-laginaren gordailua egin zen.
2.2. A. lappa erauzkinaren HPLC analisia
A. lappa errefluxu-aparatu bat erabiliz erauzi zen (ur destilatua, 3 ordu 100 °C-tan). Erauzitako disoluzioa iragazi eta presio baxuko lurrungailu bat erabiliz kondentsatu zen. A. lappa erauzketak % 44,69ko etekina izan zuen -80 °C-tan izoztu-lehortu ondoren. A. lapparen analisi kromatografikoa 1260 InfinityⅡ HPLC sistema batera konektatutako HPLC batekin egin zen (Agilent, Pal Alto, CA, AEB). Bereizketa kromatikorako, EclipseXDB C18 zutabea (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) erabili zen 35 °C-tan. Laginaren 100 mg guztira 10 mL % 50eko metanoletan diluitu eta 10 minutuz sonikatu ziren. Laginak 0,45 μm-ko xiringa-iragazki batekin (Waters Corp., Milford, MA, AEB) iragazi ziren. Fase mugikorraren konposizioa % 0,1eko azido fosforikoa (A) eta azetonitriloa (B) izan zen, eta zutabea honela eluitu zen: 0–60 min, % 0; 60–65 min, % 100; 65–67 min, % 100; 67–72 min, % 0ko B disolbatzailea, 1,0 mL/min-ko emari-abiadurarekin. Efluentea 210 nm-tan behatu zen, 10 μL-ko injekzio-bolumen bat erabiliz. Analisia hirukoiztuta egin zen.
2.3. Animalien Ostatua eta Kudeaketa
5 asteko Sprague-Dawley (SD) arratoi arrak eta 6 asteko ICR sagu arrak Samtako Bio Korea-tik (Gyeonggi-do, Korea) erosi ziren. Animaliak tenperatura konstantea (22 ± 2 °C) eta hezetasuna (55 ± % 10) zituen gela batean eduki ziren, eta 12/12 orduko argi/iluntasun zikloa. Animaliak baldintzarekin ohitu ziren esperimentua hasi baino astebete baino gehiago lehenago. Animaliek ad libitum pentsua eta ura zuten. Gachon Unibertsitateko animalien zaintzarako eta maneiatzeko egungo arau etikoak (GIACUC-R2019003) zorrotz bete ziren animaliekin egindako esperimentu-prozedura guztietan. Ikerketa ikertzaile-itsuarekin eta saiakuntza paraleloan diseinatu zen. Eutanasia-metodoa Animalien Esperimentu Etikoko Batzordearen jarraibideen arabera jarraitu genuen.
2.4. MIA injekzioa eta tratamendua
Arratoiak ausaz 4 taldetan banatu ziren: talde faltsua, kontrol taldea, indometazina eta A. lappa. % 2ko isofluorano O2 nahastearekin anesteziatuta, arratoiei 50 μL MIA (40 mg/m²; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, AEB) injektatu zitzaien belauneko artikulazioetan, OA esperimentala eragiteko. Tratamenduak honela egin ziren: kontrol eta talde faltsuak AIN-93G oinarrizko dietarekin bakarrik mantendu ziren. Indometazina taldeari bakarrik eman zitzaion indometazina (3 mg/kg) AIN-93G dietan sartuta, eta A. lappa 300 mg/kg-ko taldeari A. lappa (300 mg/kg) osatutako AIN-93G dieta esleitu zitzaion. Tratamenduak 24 egunez jarraitu ziren OA indukzio egunetik aurrera, 190-210 g gorputz-pisuko 15-17 g-ko tasan, egunero.
2.5. Pisua jasateko neurria
OA indukzioaren ondoren, arratoien atzeko gorputz-adarretako pisu-ahalmena neurtu zen incapacitance-MeterTester600 neurgailuarekin (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, AEB), aurreikusitako moduan. Atzeko gorputz-adarretako pisu-banaketa kalkulatu zen: pisu-ahalmena (%)
