Saposhnikovia divaricata olio purua kandelak eta xaboiak egiteko handizkako difusore olio esentziala kanabera erregailu difusoreetarako berria
deskribapen laburra:
2.1. SDEren prestaketa
SD-ren errizomak belar lehor gisa erosi ziren Hanherb Co.-tik (Guri, Korea). Landare-materialak taxonomikoki baieztatu zituen Koreako Medikuntza Orientaleko Institutuko (KIOM) Go-Ya Choi doktoreak. Ale bat (2014 SDE-6 zenbakia) Koreako Baliabide Belar Estandarraren Herbarioan gorde zen. SD-ren errizoma lehorrak (320 g) bi aldiz erauzi ziren % 70eko etanolarekin (2 orduko errefluxuarekin) eta ondoren erauzkin hori presio murriztuan kontzentratu zen. Dekokzioa iragazi, liofilizatu eta 4 °C-tan gorde zen. Hasierako material gordinen erauzkin lehorraren etekina % 48,13 izan zen (p/p).
2.2. Kromatografia likido errendimendu handiko (HPLC) analisi kuantitatiboa
Kromatografia-analisia HPLC sistema batekin (Waters Co., Milford, MA, AEB) eta fotodiodo-multzoko detektagailu batekin egin zen. SDEren HPLC analisirako, lehen-O-glukosilzimifugina estandarra Koreako Medikuntza Tradizionalaren Industriaren Sustapen Institututik (Gyeongsan, Korea) erosi zen, etaseg-O-glukosilhamaudol eta 4′-O-β-D-glukosil-5-OM-metilvisaminola gure laborategian isolatu eta analisi espektralen bidez identifikatu ziren, batez ere NMR eta MS bidez.
SDE laginak (0,1 mg) % 70eko etanolean (10 mL) disolbatu ziren. Kromatografia-bereizketa XSelect HSS T3 C18 zutabe batekin egin zen (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, AEB). Fase mugikorra azetonitriloz (A) eta % 0,1eko azido azetikoz (B) osatuta zegoen, 1,0 mL/min-ko emari-abiaduran. Urrats anitzeko gradiente programa bat erabili zen, honela: % 5 A (0 min), % 5-20 A (0-10 min), % 20 A (10-23 min) eta % 20-65 A (23-40 min). Detekzio-uhin-luzera 210-400 nm-tan eskaneatu eta 254 nm-tan erregistratu zen. Injekzio-bolumena 10,0 izan zen.μL. Hiru kromonak zehazteko disoluzio estandarrak 7,781 mg/mL-ko azken kontzentrazioan prestatu ziren (lehentasunezko-O-glukosilzimifugina), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukosil-5-O-metilvisaminola), eta 31,125 mg/mL (seg-O-glukosilhamaudol) metanolean eta 4 °C-tan mantenduta.
2.3. Jarduera antiinflamatorioaren ebaluazioaIn vitro
2.3.1. Zelulen kultura eta laginen tratamendua
264.7 zelula gordinak American Type Culture Collection-etik (ATCC, Manassas, VA, AEB) lortu eta % 1eko antibiotikoak eta % 5,5eko FBS zituen DMEM medio batean hazi ziren. Zelulak % 5eko CO2-ko atmosfera heze batean inkubatu ziren 37 °C-tan. Zelulak estimulatzeko, medioa DMEM medio freskoarekin eta lipopolisakaridoarekin (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, AEB) 1 °C-tan ordezkatu zen.μg/mL gehitu zen SDEren presentzian edo gabezian (200 edo 400)μg/mL) beste 24 orduz.
Zelulak SDErekin tratatu eta LPSrekin estimulatu ziren 24 orduz. NO ekoizpena nitritoa neurtuz aztertu zen Griess erreaktiboa erabiliz, aurreko ikerketa baten arabera [12]. PGE2 eta TNF zitokin inflamatorioen jariaketaα, eta IL-6 ELISA kit bat erabiliz zehaztu zen (I+G sistemak) fabrikatzailearen argibideen arabera. SDE-k NO eta zitokinen ekoizpenean dituen efektuak 540 nm edo 450 nm-tan zehaztu ziren Wallac EnVision bat erabiliz.™Mikroplaka irakurgailua (PerkinElmer).
2.4. Artrosiaren aurkako jardueraren ebaluazioaZuzenean
2.4.1. Animaliak
Sprague-Dawley arratoi arrak (7 astekoak) Samtako Inc.-etik (Osan, Korea) erosi eta baldintza kontrolatuetan eduki ziren, 12 orduko argi/ilun ziklo batekin.°C eta% hezetasuna. Arratoiei laborategiko dieta eta ura eman zitzaizkiennahi adinaProzedura esperimental guztiak Osasun Institutu Nazionalen (NIH) jarraibideen arabera egin ziren eta Daejeon unibertsitateko (Daejeon, Koreako Errepublika) Animalien Zaintza eta Erabilera Batzordeak onartu zituen.
2.4.2. Arratoietan MIArekin OAren indukzioa
Animaliak ausaz banatu eta tratamendu-taldeetan esleitu ziren ikerketa hasi aurretik (talde bakoitzeko). MIA disoluzioa (3 mg/50μ% 0,9ko gatz-soluzioa) zuzenean injektatu zen eskuineko belauneko artikulazio barruko espazioan, ketamina eta xilazina nahasketa batekin eragindako anestesiaren pean. Arratoiak ausaz lau taldetan banatu ziren: (1) MIA injekziorik gabeko gatz-soluzioko taldea, (2) MIA injekzioarekin MIA taldea, (3) SDEz tratatutako taldea (200 mg/kg) MIA injekzioarekin, eta (4) indometazinaz (IM) tratatutako taldea (2 mg/kg) MIA injekzioarekin. Arratoiei ahotik eman zitzaien SDE eta IM MIA injekzioa baino astebete lehenago, 4 astez. Ikerketa honetan erabilitako SDE eta IM dosia aurreko ikerketetan erabilitakoetan oinarritu zen [10,13,14].
2.4.3. Atzeko hanken pisu-banaketaren neurketak
OA indukzioaren ondoren, atzeko hanken pisu-euskarriaren jatorrizko oreka hautsi zen. Ezgaitasun-probatzaile bat (Linton instrumentation, Norfolk, Erresuma Batua) erabili zen pisu-euskarriaren tolerantziaren aldaketak ebaluatzeko. Arratoiak arretaz jarri ziren neurketa-ganberan. Atzeko gorputz-adarrak eragindako pisu-euskarriaren indarra 3 segundoko epean batez beste kalkulatu zen. Pisu-banaketa erlazioa ekuazio honen bidez kalkulatu zen: [eskuineko atzeko gorputz-adarraren pisua/(eskuineko atzeko gorputz-adarraren pisua + ezkerreko atzeko gorputz-adarraren pisua)] × 100 [15].
2.4.4. Serumeko zitokinen mailen neurketak
Odol laginak 1.500 g-tan zentrifugatu ziren 10 minutuz 4 °C-tan; ondoren, seruma bildu eta -70 °C-tan gorde zen erabili arte. IL-1 mailakβIL-6, TNF-α, eta serumeko PGE2 R&D Systems-eko (Minneapolis, MN, AEB) ELISA kitak erabiliz neurtu ziren, fabrikatzailearen argibideen arabera.
2.4.5. Denbora errealeko RT-PCR analisi kuantitatiboa
RNA osoa belauneko artikulazioko ehunetik erauzi zen TRI erreaktiboa® erabiliz (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, AEB), alderantzizko transkripzioa egin zen cDNA bihurtuz eta PCR bidez anplifikatu zen TM One Step RT PCR kit bat erabiliz, SYBR berdearekin (Applied Biosystems, Grand Island, NY, AEB). Denbora errealeko PCR kuantitatiboa Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR sistema erabiliz egin zen (Applied Biosystems, Grand Island, NY, AEB). Primer sekuentziak eta zunda-sekuentzia taulan ageri dira.1. Lagin-ADNc-en zatiak eta GAPDH ADNc kantitate berdina TaqMan® Universal PCR master nahasketarekin anplifikatu ziren, DNA polimerasa duena, fabrikatzailearen argibideen arabera (Applied Biosystems, Foster, CA, AEB). PCR baldintzak hauek izan ziren: 2 minutu 50 °C-tan, 10 minutu 94 °C-tan, 15 segundo 95 °C-tan eta 1 minutu 60 °C-tan, 40 zikloz. Helburu-genearen kontzentrazioa Ct metodo konparatiboa erabiliz zehaztu zen (anplifikazio-diagramaren eta atalasearen arteko gurutzaketa-puntuan dagoen ziklo-zenbakia), fabrikatzailearen argibideen arabera.
Artrosia (OA) adinekoengan ohikoena den muskulu-eskeletoko nahasmendu eta artikulazioetako endekapenezko gaixotasun ohikoena da [1]. OA lesioek, kartilagoaren egitura eta funtzioaren galerak eta hanturazko eta hanturaren aurkako bideen deserregulazioak eragindako egoera da [2,3]. Batez ere artikulazio sinovialen kartilago artikularrari eta hezur subkondralari eragiten die, eta artikulazioen haustura eragiten du, pisua jartzean mina eraginez, ibiltzean eta zutik jartzean barne [4].
Ez dago OA sendabiderik, kartilagoa suntsitzen denean leheneratzea oso zaila baita.5]. Tratamenduaren helburuak mina arintzea, artikulazioen mugikortasuna mantentzea edo hobetzea, artikulazioen indarra handitzea eta gaixotasunaren desgaitasun-ondorioak minimizatzea dira. OAren tratamendu farmakologikoek mina murriztea dute helburu, pazientearen artikulazioen funtzioa eta bizi-kalitatea handitzeko. Kartilagoaren suntsipena OAren gertaera nagusia den arren, kolagenoaren degradazioa da OAren progresio itzulezina zehazten duen oinarrizko gertakaria, hanturarekin lotuta [6,7]. Jarduera antiinflamatorioa eta kondrobabeslea duten tratamenduek mina arintzea eta matrizearen osotasuna mantentzea espero da OA duten pazienteetan.
Beraz, hantura gutxitzea onuragarria izango da OAren kudeaketan. Azken ikerketek iradokitzen dute belar-baliabideek babes-eginkizunak dituztela OAren progresioan, kondrozitoen hantura eta kartilagoaren suntsipen gehiago arintzeko, artikulazioekin lotutako ehunekin elkarreragiteko duten gaitasunaren bidez, eta ondorioz artikulazioetako mina arintzen da [8].
ErroaSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) medikuntza tradizionalean asko erabili izan da buruko mina, mina, hantura eta artritisa tratatzeko Korean eta Txinan [9,10]. Hainbat efektu farmakologikoSaposhnikovia divaricata(SD) propietate antiinflamatorioak, analgesikoak, antipiretikoak eta antiartritikoak ere badituzte [9,11]. Duela gutxiko ikerketa batek frogatu zuen SD kromona-estraktuak kolagenoak eragindako artritisaren sagu-eredu batean artritis erreumatoidearen aurkako efektu potentzialak dituela [10]; hala ere, ikerketa gutxi egin dira honen jarduera antiinflamatorioa eta antiartritikoa babestekoSaposhnikovia divaricataerauzketa (SDE).
Beraz, egungo ikerketak SDren % 70eko etanol-estraktu baten hanturaren aurkako eta osteoartritisaren aurkako jarduerak ikertu zituen. Lehenik eta behin, SDEren hanturaren aurkako efektua ebaluatu zen.in vitroLPS-k eragindako RAW 264.7 zeluletan. Ondoren, SDE-ren antiosteoartritis efektua neurtu zen pisu-eramatearen banaketa, artikulazio-kartilagoaren degradazioa eta hanturazko erantzunak ebaluatuz, sodio iodoazetato monosodikoaren (MIA) bidez eragindako OA-ren arratoi-eredu batean.